De novo assembly

$ /usr/local/Bio/velvet_1.2.10/contrib/shuffleSequences_fasta/shuffleSequences_fastq.pl BL21-20x_1.fastq  BL21-20x_2.fastq BL21-paired.fastq  

• 최근에는 -separate 옵션이 추가되어서 2개의 paired file을 그대로 공급해도 됨
• velvetg 또는 velveth를 실행하여 MAXKMERLENGTH를 확인

$ /usr/local/Bio/velvet_1.2.10/velveth velvet_out 53 -shortPaired -fastq BL21-paired.fastq 또는
$ /usr/local/Bio/velvet_1.2.10/velveth velvet_out 53 -shortPaired -fastq -separate BL21-20x_1.fastq BL21-20x_2.fastq
$ /usr/local/Bio/velvet_1.2.10/velvetg velvet_out -cov_cutoff auto -exp_cov auto
$ /usr/local/Bio/bin/n50.pl contigs.fa (결과의 확인)

• BioPerl이 설치되어 있어야 함
• velveth, velvetg가 PATH 환경변수에 설정되어 있어야 함
• -optFuncKmer 기본 설정은 n50(Lcon은 large contig의 수에 최적화)
• hash length(Kmer)의 범위를 -s <start value> -e <end value>로 설정하면 2씩 증가시켜 가면서 실행함. step value(기본 2)는 –x로 설정

$ export PATH=$PATH:/usr/local/Bio/velvet_1.2.10

$ /usr/local/Bio/velvet_1.2.10/contrib/VelvetOptimiser-2.2.4/VelvetOptimiser.pl -s 35 -e 61 -optFuncKmer=Lcon -f '-shortPaired -fastq BL21-paired.fastq'
$ /usr/local/Bio/bin/n50.pl auto_data_39/contigs.fa (결과의 확인)

• A5-miseq(Bioinformatics. 2015 Feb 15;31(4):587-9)은 파이프라인 구동에 필요한 모든 요소 프로그램이 패키지 안에 들어 있어서 이들을 별도로 설치할 필요가 없음
• 어댑터 서열 제거와 trimming에는 trimmomatic, error correction에는 SGA, de novo assembly에는 IDBA_UD, scaffolding에는 SSPACE를 사용
• Interleaved file이나 gzipped fastq file을 제공해도 됨
• '–begin=2 –end=5' 옵션으로 실행 단계(1~5)를 지정할 수 있음

$ /usr/local/Bio/a5_miseq_linux_20140604/bin/a5_pipeline.pl --threads=8 BL21-20x_1.fastq BL21-20x_2.fastq BL21-a5
$ /usr/local/Bio/bin/n50.pl BL21-a5.final.scaffolds.fasta (결과의 확인)